微生物生长量的测定

  微生物体积很小，测定个体生长很困难，也没有太大意义。通常微生物的生长是指群体的生长，微生物生长量是指在一定条件下微生物经过培养后群体的生长量。

  测定生长量的方法有许多种，可以直接测量培养物的体积或质量，也可以通过测量细胞组分含量或浊度等指标来间接获得微生物的量。

  (一)直接法

  1.测体积

  它是一种较为粗放的方法，通常用于初步的测定。

  操作方法如下：将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。

  2.称干重

  采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%-20%,一个细菌一般重10-12~10-13g。

  离心法：将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或红外线烘干，也可在较低的温度(-80℃或-40℃)下进行真空干燥，然后称干重。

  过滤法：如为丝状真菌可用滤纸过滤，如为细菌可用乙酸纤维膜等滤膜进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥(-40℃以下),称干重。一般在液体培养基中，细菌的浓度的数量级大约为108CFU/mL,100 mL培养物可获得10 mg ~300 mg干重的细菌。

  (二)间接法

  1.代谢指标法

  微生物生长过程中伴随着的物质合成与利用，因此很多代谢指标与细菌生长量相关，这些指标可用作生长测定的相对值。

  大多数细菌的含氮量约为干重的12.5% ,酵母菌约为7.5% ,霉菌约为6.0%.总氮在细胞粗蛋白中的含量也较为稳定。因此，培养物含氮量可以近似反应生长量。含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样品，操作过程较繁锁。

  微生物新陈代谢过程中离不开碳元素。测定培养物含碳量的方法如下：将培养物混入1ml水或无机缓冲液中，用2 mL2%重铬酸钾溶液在100 ℃下加热30 min,冷却后，加水稀释至5 mL,在580 nm波长下测定光密度值(用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线),即可推算出生长量。

  微生物细胞内的其他成分，如磷、DNA、RNA、ATP和N-乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、产气、产二氧化碳(用标记葡萄糖作基质)、耗氧、黏度和产热等指标，也都可以用于生长量的测定。

  2.比浊法

  微生物在液体培养基中生长，由于个体体积和细胞数量的增加，引起培养物混浊度的增高。通过测定培养物的浊度可以近似推断其生长量。

  比浊法通常采用McFarland比浊管，用不同浓度的氯化钡与稀硫酸配制成的10支试管，其中形成的硫酸钡有10个浓度梯度，分别对应10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定)。某一未知浓度的菌液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该菌液的大致浓度。如要精确测定培养物的浊度，则需要用分光光度计进行。在可见光的450 nm~650 nm波长内均可测定。